ИССЛЕДОВАНИЕ БИОПЛЕНОК МИКОБАКТЕРИЙ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ЙОДСОДЕРЖАЩЕГО ПРЕПАРАТА

В статье представлены данные по изучению мор-фологических и денситометрических особенностей формирования микобактериями биопленок до и после воздействия йодсодержащего препарата «Йодлукман». В опытах использовали культуры микроорганизмов Mycobacterium B5, которые культивировали на среде Левенштейна-Йенсена при 37 ºС. Формирование био-пленок микобактерий исследовали до и после воздейст-вия препарата «Йодлукман». Оптическую плотность жидкости определяли в фотометрическом анализато-ре. В лунки вносили по 200 мкл культур микроорганиз-мов и культивировали 24 ч при 37 0С. В каждую лунку вносили по 200 мкл 0,1 %-го раствора кристаллвиоле-та. Через 20 мин лунки трижды промывали буферным раствором, подсушивали и фиксировали в течение 30 мин 200 мкл 95° этилового спирта. Для изучения этапов формирования биопленок применяли способ культивирования бактерий в МПБ. Для контроля роста и развития бактерий использовали окраску 1,0 %-м вод- ным раствором метиленового синего. Наряду с обще- принятым методом применяли фиксацию парами 25,0 %-го раствора глутарового альдегида в течение 3-5 ч, контрастирование препаратов проводили парами 2,0-4,0 %-го водного раствора осмиевой кислоты (OsO4) в течение 2-3 мин. При исследовании биопленок микобактерий выявляли этапы: седиментация; фикса-ция; коаггрегация, рост микроколоний; формирование кластеров и архитектоники биопленки; дисперсия. Воз-действие препарата «Йодлукман» в концентрации 2,5 %, при расходе рабочего раствора 250 мл/м² и экспо-зиции не менее 3 ч полностью обеззараживало поверх-ности тест-объектов, которые были эксперименталь- но контаминированы микобактериями. Происходило разрушение межклеточного матрикса, целостность клеток, находившихся под биопленкой, нарушалась, что сопровождалось увеличением светопреломления и сни-жением оптической плотности. Для обеззараживания поверхностей тест-объектов, контаминированных микобактериями, установлена эффективность дезин-фицирующего препарата «Йодлукман», представляю-щего собой комплекс йода кристаллического и полимер-ного поверхностно-активного компонента.

THE RESEARCH OF MYCOBACTERIA BIOFILMS UNDER THE INFLUENCE OF IODINATED PREPARATION

The study presents the data on the research of morpho-logical and densitometrical features of biofilms formation by mycobacteria before the exposure to the iodine-containing preparation "Jodlukman". The cultures of microorganisms Mycobacterium B5 were used in the experiments cultivated on Levenstein-Jensen medium at 37 °C. Biofilm formation of mycobacteria was investigated before the exposure of the drug "Jodlukman". The cultures of microorganisms were brought in holes on 200 mkl and cultivated 24 h at 37 0C. There were 200 μl of microorganism cultures put in wells and they were cultured for 24 hours at 370 ° C. After 20 minutes the wells were washed three times with buffer solution, dried and fixed for 30 minutes with 200 μl using 95 ° ethyl alcohol. To study the stages of biofilm formation the method of cultur-ing bacteria in the beef-extract broth was used. To control the growth and development of bacteria the color of 1.0 % aque-ous solution of methylene blue was used. Along with conven-tional method the fixation with 25.0 % solution of glutaraldehyde was used for 3-5 hours; the contrasting of the drugs was carried out in pairs of 2.0-4.0 % aqueous solution of osmic acid (OsO4) for 2-3 minutes. The study of biofilms mycobacteria revealed the following stages: sedimentation; fixation; coaggregation, the growth of microcolonies; for-mation of clusters and architectonics of biofilms; dispersion. The effect of the drug "Jodlukman" in 2.5 % concentration at consumption of working solution is 250ml / m² and at least 3 hours exposure completely disinfected the surface of test objects, experimentally contaminated with mycobacteria. There was destruction of intercellular matrix, the integrity of the cells under the biofilm was violated which was accompa-nied by the increase in light refraction and the decrease in optical density. For disinfecting of surfaces of test objects, contaminated with mycobacteria, the efficiency of the disin-fecting preparation "Jodlukman" representing the complex of crystalline and polymeric surface-active component was es-tablished.