Дифференцированность иммуномодулирующих эффектов аргинил-альфа-аспартил-лизил-валил-тирозил-аргинина и глюкозаминилмурамилдипептида на эффекторные функции и фенотип функционально значимых субпопуляций нейтрофильных гранулоцитов в экспериментальной модели вирусно-бактериальной коинфекции

Введение. Нетипично протекающие инфекционно-воспалительные заболевания, трудно поддающиеся стандартной терапии, связаны со все возрастающей частотой проявлений инфекционно-воспалительных заболеваний, ассоциированных с коинфицированием и антибиотикорезистентностью, что является серьезной клинической проблемой. Уточнение механизмов дефектного функционирования нейтрофильных гранулоцитов (НГ), ответственных за негативный синергизм вирусов и бактерий, актуально, а оценка возможности переориентирования функционального потенциала НГ под воздействием иммунотропных субстанций может позволить создать новые иммунотерапевтические подходы для более эффективного лечения вирусно-бактериальных коинфекций. Цель исследования - в модели вирусно-бактериальной коинфекции в системе in vitro оценить влияние аргинил-альфа-аспартил-лизил-валил-тирозил-аргинина и глюкозами-нилмурамилдипептида на эффекторные функции НГ и фенотип функционально значимых субпопуляций CD64CD32+CD16+CD11b⁺-НГ, СВ64⁺СВ32⁺СВ16⁺СБ11b⁺-НГ. Материал и методы. Проведено исследование 56 образцов периферической крови (ПК) условно-здоровых взрослых лиц. Последовательной инкубацией ПК с дцРНК, fMLP воспроизведена модель вирусно-бактериальной коинфекции. На модели коинфекции в системе in vitro проведена сравнительная оценка влияния гексапептида аргинил-альфа-аспартил-лизил-валил-тирозил-аргинина (ГП) и глюкозаминилмурамилдипептида (ГМДП) на фенотип и содержание НГ функционально значимых субпопуляций CD64CD32+CD16+CD11b+ и CD64+CD32+CD16+CD11b+; на активность NАDPH-оксидаз НГ в NBT-тесте спонтанном и стимулированном Staphylococcus aureus (штамм 209); на фагоцитарную активность НГ в реакции со S. aureus (штамм 209) с тестированием доли активно-фагоцитирующих НГ (% ФАН), с определением доли неактивных НГ (%Н), доли сформировавшихся NET и доли НГ в апоптозе. Результаты. Установлено, что ГП дополнительно стимулировал предварительно активированную в экспериментальной модели субпопуляцию НГ фенотипа CD64^-CD16^midCD32^bгightCD11b^bгight, достоверно уменьшал содержание НГ субпопуляции CD64+CD32+CD16+CD11b+, меняя ее фенотип на CD64^bгightCD16m^idCD32m^idCD11bm^id. ГМДП не влиял на уровень НГ субпопуляции CD64CD16+CD32+CD11b+, однако вызывал снижение плотности экспрессии всех мембранных рецепторов СD64^-CD16^dimCD32^dimCD11b^dim-НГ до уровня таковых в группе сравнения 1. Параллельно произошло снижение содержания НГ активированной субпопуляции СD64+CD16+CD32+CD11b+, которое сопровождалось изменением фенотипа на CD64^midCD16^dimCD32^midCD11b^mid. Заключение. Выявленные дифференцированные эффекты ГП и ГМДП на трансформированные в экспериментальной модели вирусно-бактериальной инфекции фенотипы функционально значимых субпопуляций НГ могут служить основой для разработки различных иммунотерапевтических стратегий, ориентированных на восстановление нормального функционирования НГ в зависимости от глубины выявленных нарушений.

Introduction. The emergence of atypical infectious and inflammatory diseases, that are difficult to respond to standard therapy, is associated with the increasing frequency of manifestations of the combined pathology of coinfection and antibiotic resistance, which is a serious clinical problem. Clarification of the mechanisms of defective neutrophilic granulocytes (NG) functioning responsible for the emerging negative synergism of viruses and bacteria is urgent, and the assessment of the possibility of reorienting the functional potential of NG under the influence of immunotropic substances can allow creatingon of the new immunotherapeutic approaches for more effective treatment of viral-bacterial coinfections. Aim of the study in model of viral-bacterial co-infection in vitro to assess the effect of arginyl-alpha-aspartyl-lysyl-valyl-tyrosyl-arginine and glucosaminylmuramyldipeptide on the effector functions of neutrophilic granulocytes (NG) and the phenotype of functionally significant subpopulations CD64CD32+CD16+CD11b+NG, CD64⁺CD32⁺CD16⁺CD11b⁺NG. Material and methods. A study of 56 samples of peripheral blood (PB) of apparently healthy adults was carried out. By sequential incubation of PB with dsRNA, fMLP the experimental model of viral-bacterial co-infection was reproduced. A comparative assessment of the effect of hexapeptide arginyl-alpha-aspartyl-lysyl-valyl-tyrosyl-arginine (HP) and glucosaminylmuramyldipeptide (GMDP) on the phenotype and content of functionally significant subpopulations CD64CD32+CD16+CD11b+-NG, CD64+CD32+CD16+CD11b+-NG was carried out in the coinfections experimental model in an in vitro system; on activity NADPH oxidases of NG in NBT-test spontaneous and stimulated by Staphylococcus aureus (strain 209); on phagocytic function with S. aureus (strain 209): %FAN - % active phagocytic NG, % inactive NG (%ING), % NET - %NG formed NET, %NG in apoptosis. Results. It was found that HP additionally activated the phenotype of the subpopulation previously activated in the experimental model CD64^-CD16^midCD32^brightCD11b^bright-NG significantly reduced the number of NGs in the CD64+CD32+CD16+CD11b+-NG subpopulation, changing its phenotype to CD64^brightCD16^midCD32^midCD11b^mid-NG. GMDP did not affect the number of NGs in the CD64CD32+CD16+CD11b+ subpopulation, however, it caused a decrease in the expression density of all membrane receptors CD64^-CD16^dimCD32^dimCD11b^dim-NG to the level of those in comparison group 1. In parallel, there was a decrease in the number of NGs in the activated subpopulation CD64+CD16+CD32+CD11b+-NGs, which was accompanied by a change in the phenotype in CD64^midCD16^dimCD32^midCD11b^mid-NGs. Conclusion. The revealed differentiated effects of HP and GMDP effects on the content and phenotype of functionally significant NG subpopulations transformed in the experimental model of viral-bacterial coinfection can serve as a basis for the development of various immunotherapeutic strategies aimed at restoration of the normal NG function depending on the depth of the identified disorders.