Получение и характеристика безметионинового варианта термостабильного шаперона GroEL из Thermus thermophilus

Шаперон GroEL является объектом интенсивных исследований как с точки зрения его устройства и функционирования при сворачивании белков в клетке, так и возможностей использования в создаваемых системах экспрессии для получения рекомбинантных белков в растворимых формах. Создан вариант шаперона GroEL из Thermus thermophilus, в котором все остатки метионина заменены на остатки лейцина. Полученный вариант шаперона был очищен до гомогенного состояния. Измененный GroEL полностью сохранял четвертичную структуру, присущую исходному шаперону, в виде частицы из двойного гептамера, а также сохранял исходную термостабильность. Полученный вариант шаперона интересен не только с точки зрения структурной организации GroEL, но и может быть эффективно использован в качестве белка-носителя при получении целевых рекомбинантных белков. Замена остатков метионина в белке-носителе позволяет существенно упростить последующие процедуры очистки целевых полипептидов.

Design and Characterization of No-Methionine Variant of Thermostable Thermus thermophilus Chaperone GroEL

Chaperone GroEL is the subject of extensive studies concerning its organization and functioning at folding cell proteins as well as the possibility of using it when developing new expression systems to obtain recombinant proteins in soluble forms. In this work, a new variant of Thermus thermophilus chaperone GroEL is developed, in which all methionine residues are substituted for leucine residues. Obtained variant of the chaperone was purified to homogeneity. Modified GroEL retained tetruary structure characteristic for initial chaperone consisting of double heptamer, and also retained the initial thermostability. Obtained variant of the chaperone is interesting not only from the point of view of GroEL structural organization, but it can be effectively used as a leader to obtain recombinant target proteins. The substitution of methionine residues in a leader allows to significantly simplify the following purification of target polypeptide.