Анализ фагоцитарной активности макрофагов моноцитарного происхождения и клеток Купфера. Журнал анатомии и гистопатологии

Цель исследования - сравнить фагоцитарную способность макрофагов моноцитарного происхождения как без активации, так и в условиях воздействия факторов М1- и М2-фенотипа. Материал и методы. Моноциты периферической крови и клетки Купфера печени самцов крыс Вистар получали методом градиентного центрифугирования. Клетки Купфера и моноциты крысы переносили в ростовую среду RPMI. Для активации в направлении М1-фенотипа в среду вносили липополисахарид (ЛПС) и интерферрон-γ. Для активации М2-фенотипа в среду вносили интерлейкин 4, интерлейкин 10 и интерлейкин 13. Полученные культуры макрофагов окрашивали с помощью антител к CD68. Для изучения фагоцитарной активности макрофагов клетки сажали на чашки для прижизненной микроскопии и в культуральную среду вносили латексные бусины. Результаты. Полученные культуры макрофагов моноцитарного происхождения и клеток Купфера экспрессировали CD68 на высоком уровне, добавление факторов активации не изменяло выраженность экспрессии маркера. Через 1 час после добавления в культуральную среду латексных частиц неактивированные моноцитарные макрофаги статистически значимо активнее поглощали частицы, чем клетки Купфера. Активация факторами М1- и М2-фенотипа приводила к повышению фагоцитарной активности как макрофагов моноцитарного происхождения, так и клетками Купфера. Наибольшее активирующее влияние на фагоцитарную активность оказывали факторы индукции М1-фенотипа. Выводы. Для макрофагов моноцитарного происхождения и клеток Купфера характерна разная динамика фагоцитарной активности. Моноцитарные макрофаги изначально обладают более выраженной поглотительной способностью, которая постепенно нарастает во время эксперимента. Для клеток Купфера характерно резкое колебание фагоцитарной активности: быстрое нарастание и быстрое насыщение.

Analysis of phagocytic activity of macrophages of monocytic origin and Kupfer cells

The purpose of the study was to compare the phagocytic activity of macrophages of monocytic origin both without activation and under the influence of factors of the M1 and M2 phenotype. Material and methods. Peripheral blood monocytes and Kupper liver cells of male Wistar rats were obtained by gradient centrifugation. The Kupffer cells and rat monocytes were transferred to RPMI growth medium. To activate in the direction of the M1-phenotype, LPS and IFN-γ were introduced into the medium. To activate the M2 phenotype, IL 4, IL10, and IL 13 were added to the medium. The obtained macrophage cultures were stained with antibodies to CD68. To study the phagocytic activity of macrophages, the cells were placed on plates for intravital microscopy and latex beads were added to the culture medium. Results. The macrophage cultures of monocytic origin and Kupffer cells expressed CD68 at a high level, the addition of activation factors did not change the expression of the marker. 1 hour after the addition of latex particles to the culture medium, unactivated monocytic macrophages statistically significantly absorbed particles more than Kupffer cells. Activation by factors of the M1 and M2 phenotype led to an increase in the phagocytic activity of both macrophages of monocytic origin and Kupffer cells. The most activating effect on phagocytic activity was provided by induction factors of the M1 phenotype. Conclusions. For macrophages of monocytic origin and Kupffer cells, a different dynamics of phagocytic activity is characteristic. Monocytic macrophages initially have a more pronounced absorption capacity, which gradually increases during the experiment. For Kupffer cells, a sharp fluctuation of phagocytic activity is characteristic: rapid growth and rapid saturation.