Совместное определение нирматрелвира и ритонавира в плазме крови человека методом ВЭЖХ-МС/МС

Введение. В настоящее время предполагается, что вирус SARS-CoV-2 (severe acute respiratory syndrome-related coronavirus 2), вызывающий новую коронавирусную инфекцию COVID-19 (Coronavirus Disease 2019) останется постоянной глобальной угрозой. В связи с этим, вопрос разработки лекарственных препаратов для лечения COVID-19 остается актуальным. Комбинация нирматрелвира с ритонавиром обладает прямым противовирусным действием: при ее применении удается повысить эффективность терапии и снизить риск осложнений COVID-19. Разработка и валидация методики совместного определения нирматрелвира и ритонавира в плазме крови человека является необходимой задачей для проведения аналитической части клинического исследования с целью дальнейшего изучения фармакокинетических параметров.Цель. Целью исследования является разработка и валидация методики совместного определения нирматрелвира и ритонавира в плазме крови человека методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-селективным детектированием (ВЭЖХ-МС/ МС) для дальнейшего изучения фармакокинетики.Материалы и методы. Определение нирматрелвира и ритонавира в плазме крови человека проводили методом ВЭЖХ-МС/МС. В качестве пробоподготовки был использован способ осаждения белков ацетонитрилом. Внутренний стандарт: прометазин. Подвижная фаза: 0,1%-й раствор муравьиной кислоты в воде (элюент А), 0,1%-й муравьиной кислоты в ацетонитриле (элюент В). Колонка: Phenomenex Luna C18 50 × 2,0 мм, 5 мкм. Аналитический диапазон методики: 50,00-10000,00 нг/мл для нирматрелвира, 5,00-1000,00 нг/мл для ритонавира в плазме крови. Источник ионизации и ионизация: электроспрей, положительная. Условия детектирования: 499,90 → 110,10 m/z, 499,90 → 319,20 m/z (нирматрелвир), 720,90 → 426,00 m/z, 720,90 → 296,20 m/z, 720,90 → 268,10 m/z, 720,90 → 197,10 m/z, 720,90 → 139,90 m/z (ритонавир), 285,15 → 198,05 m/z (прометазин).Результаты и обсуждение. Разработанная методика была валидирована по следующим валидационным параметрам: селективность, эффект матрицы, калибровочная кривая, точность, прецизионность, степень извлечения, нижний предел количественного определения перенос пробы, стабильность.Заключение. Разработана и валидирована методика совместного определения нирматрелвира и ритонавира в плазме крови человека методом ВЭЖХ-МС/МС. Подтвержденный аналитический диапазон методики составил 50,00-10000,00 нг/мл для нирматрелвира, 5,00- 1000,00 нг/мл для ритонавира в плазме крови. Полученный аналитический диапазон позволяет применять разработанную методику для проведения фармакокинетических исследований комбинированных препаратов нирматрелвира и ритонавира.

Introduction. SARS-CoV-2 (severe acute respiratory syndrome-related coronavirus 2) is expected to remain a persistent global threat. Therefore, development of coronavirus disease 2019 (COVID-19) drugs is the most urgent global issue. Nirmatrelvir and ritonavir combination is an oral antiviral drug combination with activity against SARS-CoV-2. Nirmatrelvir and ritonavir combination is highly efficacious in reducing the risk of COVID-19. The study describes development and validation of high-performance liquid chromatography - tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) method for the simultaneous determination of nirmatrelvir and ritonavir in human blood plasma. The method could be applied in pharmacokinetic study of nirmatrelvir and ritonavir.Aim. The aim of this study is to develop and validate a HPLC-MS/MS bioanalytical method for the determination of nirmatrelvir and ritonavir in human plasma.Materials and methods. The determination of nirmatrelvir and ritonavir in human plasma by HPLC-MS/MS. The samples were processed by acetonitrile protein precipitation. Internal standard: promethazine. Mobile phase: 0.1% formic acid solution in water (Eluent A), 0.1% formic acid in acetonitrile (Eluent B). Column: Phenomenex Luna C18 50 × 2.0 mm, 5 μm. Analytical range: 50.00-10000.00 ng/mL for nirmatrelvir, 5.00-1000.00 ng/mL for ritonavir in human plasma. Ionization source and ionization: electrospray ionization, positive. Detection conditions: 499.90 → 110.10 m/z, 499.90 → 319.20 m/z (nirmatrelvir), 720.90 → 426.00 m/z, 720.90 → 296.20 m/z, 720.90 → 268.10 m/z, 720.90 → 197.10 m/z, 720.90 → 139.90 m/z (ritonavir), 285.15 → 198.05 m/z (promethazine).Results and discussion. This method was validated for selectivity, matrix effect, calibration curve, accuracy, precision, spike recovery, the lower limit of quantification, carry-over effect and stability.Conclusion. The HPLC-MS/MS method for quantitative determination of nirmatrelvir and ritonavir in human plasma was developed and validated. The analytical range was 50.00-10000.00 ng/mL for nirmatrelvir, 5.00-1000.00 ng/mL for ritonavir in human plasma. This method was applied to investigate the pharmacokinetics of nirmatrelvir and ritonavir.