Апробация различных методик выделения возбудителя бактериоза винограда (болезнь Пирса) Xylella fastidiosa Wells et al. в ходе научно-исследовательского мониторинга в условиях Республики Крым

Возбудитель бактериоза винограда (болезнь Пирса) Xylella fastidiosa Wells et al. является одной из самых опасных и вредоносных фитопатогенных бактерий, поражающих широкий спектр растений, относящихся как к важным сельскохозяйственным культурам, так и к декоративным растениям. Бактерия колонизирует ткани ксилемы растения и распространяется насекомыми-переносчиками, питающимися ксилемным соком. Переносчиками X. fastidiosa являются насекомые, отряда Hemiptera, подотряда Auchenorrhyncha, семейств Cicadellidae, Cercopidae, Aphrophoridae и Cicadidae. По данным анализа фитосанитарного риска, проведенного специалистами Всероссийского научно-исследовательского института карантина растений (ВНИИКР) в 2014 г., был определен высокий уровень опасности интродукции и адаптации X. fastidiosa на территории Российской Федерации. Крымский полуостров является зоной возможной интродукции возбудителя болезни Пирса в связи с климатическими условиями региона, наличием большого количества основных растений-хозяев, а также насекомыхпереносчиков. С 2018 по 2020 гг. сотрудниками ВНИИКР проводилась оценка фитосанитарного состояния территории Республики Крым в рамках научно-исследовательской работы. Для исследований отбирались образцы вегетативных частей винограда, косточковых культур (персик, вишня, слива, черешня, миндаль), некоторых эфиромасличных и декоративных кустарниковых и древесных растений. Исследования отобранных образцов проходили в соответствии с международными диагностическими стандартами. Оценка фитосанитарного состояния насаждений в Республике Крым в течение трех лет показала отсутствие возбудителя X. fastidiosa на данной территории. Были апробированы две различные методики подготовки проб и выделения ДНК из разных субстратов. Проведение теста на основе ПЦР «в реальном времени» показало его высокую специфичность, так как ложноположительных или неспецифических результатов тестирования получено не было.

Xylella fastidiosa Wells et al. causes grapevine bacteriosis and is among most hazardous malicious bacterial phytopathogens affecting a wide variety of important crops and ornamental plants. The agent colonises plant xylem and transmits with insects feeding on xylem sap. The insect vectors of X. fastidiosa belong to the order Hemiptera, suborder Auchenorrhyncha, families Cicadellidae, Cercopidae, Aphrophoridae and Cicadidae. A phytosanitary control survey conducted by the All-Russian Research Institute for Plant Quarantine in 2014 identified a high risk of X. fastidiosa introduction and adaptation in the Russian Federation. The Crimean Peninsula is a potential introduction area of the Pierce’s disease agent due to suitable climatic conditions, the ample availability of major host plants, as well as insect vectors. During a research monitoring in 2018-2020, the Institute assessed the phytosanitary status of the Crimean territory. The survey sampled vegetative parts of grapevines, stone fruits (peach, cherry, plum, merry, almond), selected essential-oil and ornamental shrubs and trees. Diagnostic procedures were performed in accordance with the international standards. A three-year phytosanitary survey of the Crimean plantations revealed no presence of X. fastidiosa. Two protocols of sample preparation and DNA extraction from various substrates have been tested. A real-time PCR-based protocol was proved highly specific for zero false positive and nonspecific rates.