ПОЛУЧЕНИЕ НОВОГО ШТАММА-РЕАССОРТАНТА ВИРУСА ГРИППА A/H5N1 МЕТОДОМ ОБРАТНОЙ ГЕНЕТИКИ И АНАЛИЗ ЕГО БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ

При помощи обратной генетики был получен реассортантный штамм вируса гриппа с целью дальнейшей разработки вакцины против высокопатогенных штаммов вируса гриппа птиц (ВГП) подтипа Н5. Новый штамм recPR8-H5N1 имеет ген гемагглютинина (ГА) от высокопатогенного ВГП А/Курган/05/2005 (H5N1), выделенного на территории России, а остальные гены - от высокопродуктивного штамма A/Puerto Rico/8/34 (H1N1). Штамм recPR8-H5N1 имеет характерную для Н5 антигенную специфичность, высокую репродуктивную активность при культивировании в 12-суточных куриных эмбрионах (КЭ), вызывая их гибель в течение 36 ч. Структурных изменений в гене ГА после 5 пассажей на КЭ не обнаружено. Инактивированная эмульгированная вакцина, изготовленная в лаборатории на основе штамма recPR8-H5N1, защищала 1,5 месячных цыплят через 21 день после однократной вакцинации при контрольном заражении высокопатогенным вирусом А/Курган/05/2005 (H5N1). Заражение невакцинированных цыплят вирусом recPR8-H5N1 не вызывало клинических и патоморфологических проявлений болезни, вирус не обнаруживался в крови через 7 дней. При этом зарегистрирована специфическая сероконверсия на 14-й день после заражения. Таким образом, создан прототипный штамм recPR8-H5N1, который не вызывает болезни у птицы, имеет требуемую антигенную специфичность и накапливается с высокой эффективностью при культивировании.

Engineering by reverse genetics and characterization of the new re-assortant influenza virus strain H5N1

Reverse genetics was applied to engineering of the reassortant vaccine candidate strain against highly pathogenic avian influenza viruses (HPAIVs) of the H5 subtype. The new strain recPR8-H5N1 contains the HA gene from the Russian HPAIV A/Kurgan/05/2005 (H5N1), the NA and internal genes from A/Puerto Rico/8/34 (H1N1). The strain recPR8-H5N1 demonstrated the antigenic specificity (H5), high proliferation rate in 12 days chicken embryos, and was lethal for the embryos in 36 hours. An inactivated emulsified vaccine based on the strain recPR8-H5N1 elicited high antibody titers and protected 6-week-old chickens from lethal challenge with the HPAIV A/Kurgan/05/2005 (H5N1) on day 21 after single immunization. Infection of non-vaccinated birds with the strain recPR8-H5N1 did not cause any pathology, and the virus was not detected using PCR in blood and cloacal swabs on day 7 p.i. Specific weak seroconversion caused by infection with the strain recPR8-H5N1 was detected on day 14 p.i. As a result, a new influenza virus strain was obtained with modified properties.