Новый набор праймеров для специфичной амплификации ITS-локусов рДНК Ditylenchus destructor

Разработана методика идентификации нематоды Ditylenchus destructor , основанная на использовании различных праймеров для проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР). Два универсальных рибосомных праймера были амплифицированы во внутренней транскрибируемой области спейсера ITS-рДНК. Секвенирование продуктов ПЦР подтвердило полиморфизм между видами. Праймеры достаточно чувствительны, чтобы генерировать определенную полосу правильного размера (300 п.н.) из ДНК-матрицы определенной стадии развития D. destructor . Скринингом популяций D. destructor из Ирана и Российской Федерации проверена надежность праймеров, и ожидаемый размер полосы был получен для всех тестируемых популяций. Близкородственные виды Ditylenchus destructor также были протестированы, и специфической имплифицированной полосы не было выявлено. Результаты исследований показали, что данные разработанные праймеры могут использоваться для количественной оценки плотности D. destructor в клубнях картофеля.

A new primer set for amplification of ITS-rDNA in Ditylenchus destructor

A technique was developed for the identification of Ditylenchus destructor nematode belonging to the Ditylenchus genus, based on the use of different primers for polymerase chain reaction (PCR). Two universal ribosomal primers were amplified to the internal transcribed spacer region ITS-rDNA. The sequencing of PCR products confirmed the polymorphism between species. The primers were sensitive to generate a particular band of the correct size (300bp) from the DNA template of a single, separate D. destructor stage of development. Screening populations of D. destructor from Iran and the Russian Federation have tested the reliability of the primers, and the expected size of the band was produced for all test populations. Ditylenchus destructor closely related species have also been tested and no specific band was amplified. Such results showed that the primers currently developed are useful for quantifying the D. destructo r density in potato tuber.