Оценка гемопоэтического химеризма у минипигов при индукции иммунной толерантности к васкуляризированному композитному аллотрансплантату

Введение. Количественное определение химеризма после аллогенной трансплантации костного мозга (аТКМ) - один из основных методов оценки приживления аллотрансплантатов (в том числе при трансплантации васкуляризированных композитных комплексов тканей - ВКА) от того же донора. Полный стабильный химеризм коррелирует с длительным приживлением донорских тканей. Многократные исследования химеризма в динамике необходимы для оценки эффективности трансплантации с возможностью последующей отмены иммуносупрессивной терапии. Цель работы - оценить гемопоэтический химеризм у минипигов после аТКМ при индукции иммунной толерантности к ВКА. Материал и методы. Исследование проводили на минипигах гибридах пород Визенау и Вьетнамской вислобрюхой. Химеризм исследовали методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) на «0», «+14», «+21» и «+30» дни с использованием набора реагентов COrDIS PIG (ООО «ГОРДИЗ», Россия). Анализ результатов ПЦР проводили методом капиллярного электрофореза с использованием автоматического генетического анализатора (ABI PRISM 3500, Thermo Fisher Scientific, США). Полученные данные анализировали с использованием программного обеспечения GeneMapper (Thermo Fisher Scientific, США). Аллели оценивали по 15 микросателлитным маркерам для каждого образца крови минипига, высчитывали процентное содержание аллелей донора и реципиента при анализе химеризма. Результаты. Было исследовано 9 пар экспериментальных животных (донор-реципиент). У 5 реципиентов на +30 сутки после аТКМ в аспирате костного мозга определялись только собственные аллели. У 4 реципиентов наблюдался смешанный донорский химеризм. Методика показала чувствительность не менее 5 % в модельном эксперименте. Погрешность определения зависит от количества взятых в анализ локусов и не превышает 10 % при содержании аллелей донора 50 % в исследуемом образце. Заключение. Определение донорского химеризма у минипигов после аТКМ при индукции иммунной толерантности к ВКА продемонстрировало динамику приживления ТКМ и максимальную экспансию донорскими клетками костного мозга реципиента до 80-90 %. Метод определения химеризма с помощью STR-локусов обладает высокой чувствительностью и может быть использован в модельных экспериментах с минипигами.

Introduction. Quantitative determination of chimerism after allogeneic bone marrow transplantation (aBMT) is one of the main methods for assessing the possibility of engraftment of allografts (including transplantation of vascularized composite tissue complexes - VCA) from the same donor. Complete stable chimerism correlates with long-term engraftment of donor tissues. Dynamic studies of chimerism are necessary to assess the effectiveness of transplantation with further withdrawal of immunosuppressive therapy. Aim - to study hematopoietic chimerism in minipigs after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (aHSCT) during the induction of immunological tolerance to VCA. Material and methods. The study was performed on minipig hybrids of the Wisenau and Vietnamese pot-bellied pig. The chimerism was detected using the polymerase chain reaction (PCR) on days «0», «+14», «+21» and «+30» using the COrDIS PIG reagent kit (GORDIZ, Russia). PCR results were studied by capillary electrophoresis using an automatic genetic analyzer (ABI PRISM 3500 Thermo Fisher Scientific, USA). The obtained data were analyzed using GeneMapper software (Thermo Fisher Scientific, USA). Alleles were assessed using 15 microsatellite markers for each minipig blood sample, and the percentage of donor and recipient alleles was calculated. Results. 9 pairs of experimental animals (Donor-Recipient) were studied. In 5 recipients, on day +30 after aBMT, only their own alleles were determined in the bone marrow aspirate. Mixed donor chimerism was observed in 4 recipients. Determination of the sensitivity of the technique showed a sensitivity of at least 5 % in a model experiment. The determination error depends on the number of loci taken for analysis and does not exceed 10 % when the content of donor alleles is 50 % in the test sample. Conclusion. Determination of donor chimerism in minipigs after aBMT during the induction of immunological tolerance to VCA demonstrated the dynamics of bone marrow transplant engraftment and the maximum expansion of the recipient’s bone marrow by donor cells up to 80-90 %. The method for determining chimerism using STR loci is highly sensitive and can be used in model experiments with minipigs.