РАЗРАБОТКА И ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИК СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОСПИДИЯ ХЛОРИДА ПО ПОКАЗАТЕЛЯМ «ПОДЛИННОСТЬ» И «КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ»

Введение. Актуальность представленного исследования обусловлена необходимостью внедрения в практику контроля качества проспидия хлорида метода анализа, который характеризуется высокой чувствительностью, точностью, экспрессностью и доступностью.Цель исследования - разработка и валидация методики УФ-спектрофотометрического анализа проспидия хлорида - противо-опухолевого лекарственного средства группы диспиропиперазина.Материал и методы. Объектом исследования выступила лекарственная субстанция - порошок Проспидин (проспидия хлорид, серия 271222, срок годности до 12.2027 г., производства «УНИТЕХПРОМ БГУ»). Растворы с рабочим диапазоном концентрации от 0,05 до 0,2 моль/л для спектрофотометрического анализа приготовлены с использованием воды очищенной. Спектры поглощения c определением аналитической длины волны (λmax, нм) и величины коэффициента молярной экстинкции (ε, л·моль-1·см-1) в интервале от 200 до 400 нм получены и проанализированы на оборудовании Agilent Cary 60. Валидационные параметры определены в соответствие с регламентом ОФС.1.1.0012 «Валидация аналитических методик».Результаты. Выполнена валидационная оценка разработанных аналитических методик для определения подлинности и содержания действующего вещества методом УФ-спектрофотометрии, которая включала в себя испытания на специфичность (в присутствии NaCl 0,9% раствора), аналитическую область 0,05-0,2 моль/л, линейность ( r =0,9997), правильность, прецизионность в вариантах повторяемости 3,89±0,24 ( х ±SD) и внутрилабораторной воспроизводимости (ε=2,1%), а также устойчивость.Выводы. Анализ электронных спектров водных растворов проспидия хлорида продемонстрировал наличие R-полосы поглощения с характерной длиной волны в дальней УФ-области при λmax=282±0,4 нм, а также λmin=255±0,4 нм. Установлено, что поглощение при λmax в диапазоне концентраций от 0,05 до 0,2 моль/л раствора проспидия хлорида, содержащего гетероатомы азота с неподеленными электронными парами, обусловлено реализацией так называемого формально запрещенного n →σ* электронного перехода с участием молекулярных орбиталей. Характерный вид электронного спектра с λmax и λmin, соответствие закону Бугера-Ламберта-Бера в заданном интервале концентраций, рассчитанное значение молярного коэффициента экстинкции ε (л·моль-1·см-1) позволяют использовать описанные выше спектральные характеристики для определения подлинности и содержания действующего вещества в контроле качества проспидия хлорида.

Objective. The work is devoted to the development and validation of UV-spectrophotometric analysis of propidium chloride, an antitumour drug of the dyspyropiperazine group. The relevance of the study is due to the need to introduce into the practice of quality control of prospidium chloride analysis method characterised by high sensitivity, accuracy, rapidity and availability.Material and methods. The object of the study was a medicinal substance-powder Prospidin (Prospidium chloride, series 271222, expiry date until 12.2027g, produced by «Unitehprom BSU», Minsk). Solutions with working concentration range from 0.05 mol/l to0.2 mol/l for spectrophotometric analysis were prepared using purified water. Absorption spectra with determination of analytical wavelength (λmax, nm) and value of molar absorption coefficient ε, (l mol-1cm-1) in the range from 200 nm to 400 nm were obtainedand analysed on Agilent Cary 60 equipment. Validation parameters were determined in accordance with the regulations of the General Pharmacopoeial Article 1.1.0012.15. Results. Validation evaluation of the developed analytical techniques for the determination of authenticity and active ingredient content by UV spectrophotometry included tests for specificity (in the presence of NaCl 0.9% solution), analytical range (0.05-0.2 mol/L), linearity (r=0.9997), accuracy , precision in terms of repeatability 3.89±0.24 ( х ±SD) and intra-laboratory reproducibility (ε=2.1%) and stability .Conclusion. The analysis of electronic spectra of aqueous solutions of propidium chloride demonstrated the presence of R-band absorption (German radikalartig - radical, for systems with unshared electron pairs) with a characteristic wavelength in the far-UV region at λmax=282±0.4 nm, and λmin=255±0.4 nm. It was found that the absorption at λmax in the concentration range from 0.05 mol/L to 0.2 mol/L of a solution of propidine chloride containing nitrogen heteroatoms with unshared electron pairs is due to the implementation of the so-called formally forbidden n→σ* electronic transition involving molecular orbitals. The characteristic appearance of the electronic spectrum with λmax and λmin, compliance with the Beer-Lambert law in the given concentration range, the calculated value of the molar extinction coefficient ε (l mol-1cm-1) - allow to use the above described spectral characteristics to determine the authenticity and content of the active substance in quality control of prospidium chloride.