ТЕХНОЛОГИЯ ВЫДЕЛЕНИЯ И ОЧИСТКИ L-ЛИЗИН-а-ОКСИДАЗЫ

Использованы два способа выделения и очистки противоопухолевого фермента L-лизин-а-оксидазы из культуры гриба триходермы. Согласно первому из них, сопутствующие белки отделяли от культуральной среды добавлением 15%-ного раствора сульфата аммония, фермент осаждали при 70%-ной концентрации сульфата аммония, фракцию концентрировали от объема 55 л до 1,5 л путем ультрафильтрации. Затем проводили очистку с использованием сорбентов ДЕАЕ-сефацела, сефадекса G-100 и G-200, в результате чего удельная активность фермента L-лизин-а-оксидазы повысилась от 4 до 200 ед/мг. Другой способ выделения и очистки фермента состоял в последовательной 4-ступенчатой мембранной фильтрации (поры от 0,2 мкм до размера, обеспечивающего прохождение белка массой 30 кДа). Чистоту препарата проверяли методом капиллярного электрофореза. В результате обеих процедур получен фермент с удельной активностью 50 ед/мг белка.

Two methods have been applied to isolation and purification of an anti-tumor enzyme of L-lysine-a-oxidase from trichoderma fungi culture. According to the first protocol, the concomitant proteins were eliminated from culture liquid by the addition of 15% ammonium sulfate solution; the target enzyme was precipitated at 70% (NH₄)₂SO₄ concentration and the fraction was concentrated from 55 l to 1,5 l volume by ultrafiltration. The preparation was then purified by chromatography on DEAE-Sephacell, Sephadexes G-100 and G-200. As a result, the specific activity of lysine-oxidase increased from 4 U/mg to 200 U/mg. The second method implied the isolation and purification of the enzyme by means of consecutive 4-step membrane filtration (with the pore size from 0.2 um to the value providing the passage of 30 kDa proteins). The purity of the preparation was controlled by capillary electrophoresis. The resulting specific activity of the enzyme obtained by either procedure was similar and equal to 50 U/mg of protein.