Роль остатков тирозина в каталитической активности глутамин(аспарагин)азы из Pseudomonas aurantiaca 875

Исследовали роль остатков тирозина в реакции дезамидирования глутамина и аспарагина ферментом -глутамин(аспарагин)азой (ГА) из Pseoudomonas aurantiaca 875. Для модификации остатков тирозина белок обрабатывали тетранитрометаном в различных условиях проведения реакции (концентрации реагента, температуры, времени обработки и присутствия стабилизаторов фермента). Было показано, что в состав молекулы входят 28 остатков тирозина. По реакционной способности взаимодействия с тетранитрометаном их можно разделить на три группы: расположенные на поверхности фермента и легко доступные для модификации; частично экранированные и полностью экранированные, экспонированные внутрь молекулы, недоступные для нитрования даже в самых жестких условиях проведения реакции. Для проявления активности ферментом существенными оказались три тирозиновых остатка из восьми, расположенных на поверхности макромолекулы фермента. Модификация этих остатков снижала активность фермента на 85% от исходной активности ГА. Такой результат свидетельствует о том, что, по крайней мере, 1 остаток тирозина должен входить в состав активного центра фермента, а остальные важны для стабилизации активной конформации фермента.

The role of tyrosine residues in catalytical activity of glutamin(asparagin)ase from Pseudomonas aurantiaca 875

The significance of tyrosine residues of enzyme from Pseudomonas aurantiaca 875 which catalyses deamidation reaction of glutamine and asparagine was studied For the tyrosine residues modification the protein was treated by tetranitromethane in different conditions of reaction ( reagent concentration, temperature, time and the presence of enzyme stabilizators). It was shown that there are 28 tyrosine residues in one mole of enzyme. According to reaction capability of interaction between enzyme and tetranitromethane the residues may be divided into 3 groups: partly screened, fully screened, and exposed in intramolecular structures which were unaccessible for nitration reaction even in a very rough conditions. For the developing of enzyme aclivily three tyrosine residues from eight on outer surface of protein molecule were essential. Modification of these residues could decreased the enzyme activity up to 85 percent from initial state. Such a results suggest that at least one tyrosine residue must included in the active site of enzyme, while others are probably important for the stabilization of protein conformation.