Способ получения органоидов из опухолевой ткани органов головы и шеи

Изобретение относится к биотехнологии, клеточной биологии и медицине, в частности к способу получения трёхмерных клеточных органоидов из плоскоклеточных опухолей органов головы и шеи. Для осуществления указанного способа первичный материал транспортируют из оперативного блока в культуральную лабораторию в срок не более 4 часов при хранении материала при +4°С в транспортной среде. Далее ткань трижды промывают в растворе ЭДТА, затем аналогичным образом в растворе антибиотика-антимикотика, после чего трижды отмывают от реагентов в буферном растворе. Опухолевую ткань максимально полно очищают от окружающих ее тканей перитуморальной области. Для ферментативной диссоциации ткани в течение 60-90 минут при 37°С в условиях постоянного перемешивания на орбитальном шейкере с минимальной скоростью 50 об/мин используют рекомбинантные коллагеназы или рекомбинантный трипсин, либо их комбинацию, дополнительно используют рекомбинантную ДНКазу. Объем диссоциирующего раствора превышает объем материала в 5 раз. Суспензию изолированных из ткани клеток разбавляют буферным раствором в 10 раз и пропускают через нейлоновое сито с размером ячеек 100 мкм. В качестве культуральной среды используют DMEM/F12, либо 199 среду, необходимую для поддержания недифференцированного состояния опухолевых стволовых клеток и предотвращения эпителиально-мезенхимального перехода. В культуральную среду вносят 2% v/v аутогенной плазмы, полученной от донора опухолевой ткани. После культивирования в течение нескольких суток сформировавшиеся органоиды могут быть извлечены для исследования либо перенесены в более вязкий матрикс на основе культуральной среды, содержащей 25% v/v аутогенной плазмы. Настоящее изобретение позволяет получить органоиды из опухолевой ткани органов головы и шеи. 3 ил., 1 табл., 2 пр.