Оптимизация состава питательной среды и изучение стадий роста изолята "Калуга 2020" Mycoplasma bovis

Mycoplasma bovis является одним из возбудителей микоплазмозов крупного рогатого скота, вызывающим респираторные болезни, мастит, артрит и кератоконъюнктивит. В статье представлены результаты исследования по оптимизации компонентного состава питательной среды для культивирования изолята «Калуга 2020» Mycoplasma bovis, а также изучения стадий роста возбудителя. Для определения активности микоплазм использовали метод измерения цветоизменяющих единиц и культуральный метод с подсчетом колониеобразующих единиц. Установлено, что при культивировании в оптимизированной питательной среде на основе модифицированного бульона Хейфлика микроорганизм вступает в фазу логарифмического роста по истечении первых 24 ч роста, через 72 ч культура микоплазм переходит в стабильный период, а через 84 ч регистрируется фаза спада. Влияние процентного содержания глюкозы, свежего дрожжевого экстракта и сыворотки крови лошади в питательной среде на накопление изолята «Калуга 2020» Mycoplasma bovis оценивали с использованием метода «один фактор за раз». Было установлено, что наибольшее влияние на накопление микоплазм оказывало содержание в питательной среде таких факторов роста, как свежий дрожжевой экстракт и сыворотка крови лошади (p < 0,05), в то время как изменение количества глюкозы не стимулировало рост Mycoplasma bovis. В результате проведенных исследований определен подходящий состав и подобрано оптимальное содержание факторов роста в среде для культивирования изолята «Калуга 2020» Mycoplasma bovis: 12,5% свежего дрожжевого экстракта и 25% сыворотки крови лошади. Применение оптимизированной питательной среды на основе модифицированного бульона Хейфлика позволило увеличить накопление биомассы микоплазм в 5 раз (3,98 х 10⁹ КОЕ/мл) по сравнению со стандартной средой (0,79 х 10⁹ КОЕ/мл).

Mycoplasma bovis is considered one of bovine mycoplasmosis pathogens responsible for respiratory diseases, mastitis, arthritis and keratoconjunctivitis. The paper presents results of the study on optimizing the component composition of the culture medium for Mycoplasma bovis “Kaluga 2020” isolate, as well as the study of this pathogen's growth stages. The color-changing units assay and the culture method combined with colony-forming unit quantification were used for determination of Mycoplasma activity. It was found that when cultured in an optimized nutrient medium based on modified Hayflick broth, the microorganism enters a logarithmic growth phase after first 24 hours of growth, in 72 hours the Mycoplasma culture enters a stability phase, and a decline phase is recorded in 84 hours. The effect of percentage content of glucose, fresh yeast extract and horse serum in the nutrient medium on accumulation of Mycoplasma bovis “Kaluga 2020”isolate was evaluated using the one-factor-at-a-time approach. It was found that the greatest effect on Mycoplasma accumulation was exerted by such growth factors as fresh yeast extract and horse serum in the nutrient medium (p < 0.05), while changes in the amount of glucose did not stimulate Mycoplasma bovis growth. Based on results of the conducted studies, the appropriate composition was determined and the optimal content of growth factors in the medium for culturing Mycoplasma bovis “Kaluga 2020” isolate was selected: 12.5% of fresh yeast extract and 25% of horse serum. The use of the optimized nutrient medium based on modified Hayflick broth allowed 5-fold increase in accumulation of Mycoplasma biomass (3.98 x 10⁹ CFU/ml) compared to the standard medium (0.79 x 10⁹ CFU/ml).