Повышенная супрессорная активность трансформированных ex vivo регуляторных Т-клеток в сравнении с нестимулированными клетками того же донора

Регуляторные Т-клетки CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺СD127low (Трег) играют ключевую роль в поддержании толерантности к аутоантигенам, подавляют функцию эффекторных Т- и В-лимфоцитов и обеспечивают баланс между эффекторным и регуляторным звеном иммунитета. У больных с аутоиммунными заболеваниями снижено содержание Трег и нарушена функция этих клеток. Заместительная терапия аутологичными клетками пациента, выращенными ex vivo, может восстановить нарушенный баланс иммунной системы. Нами разработана методика культивирования клеток-предшественников Трег вне организма человека, которая позволяет из 50 мл периферической крови вырастить 300-400 млн Трег в течение одной недели. В настоящем исследовании показано, что по сравнению с Трег периферической крови, выращенные ex vivo клетки на 90-95% имеют фенотип CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺СD127low Трег и повышенную экспрессию ключевых генов транскрипции FoxP3 и Helios. В трансформированных Трег повышена степень деметилирования в промоторном участке гена FoxP3 и активированы гены-маркёры пролиферации циклина В1, Ki67 и LGALS 1. Трансформированные ex vivo Трег обладают повышенной супрессорной активностью, и до 80-90% клеток в популяции секретируют цитокины TNFα и IFNγ. Наши данные показывают, что выращенные ex vivo аутологичные Трег клетки имеют генетические, маркёрные и функциональные характеристики регуляторных Т-клеток, которые в будущем могут быть использованы для адаптивной иммунотерапии больных с аутоиммунными заболеваниями, а также для подавления трансплантационного иммунитета, в частности, реакции трансплантата против хозяина.

Regulatory T-cells CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺CD127low (Tregs) play a key role in the maintenance of tolerance to auto antigens, inhibit function of effector T and B lymphocytes, and provide a balance between effector and regulatory arms of immunity. Patients with autoimmune diseases have decreased Treg numbers and impaired suppressive activity. Transformed ex vivo autologous Tregs could restore destroyed balance of the immune system. We developed a method for Treg precursor cell cultivation. Following the method, we were able to grown up 300-400 million of Tregs cells from 50 ml of peripheral blood during a week. Transformed ex vivo Tregs are 90-95% CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺CD127low and have increased expression of transcription genes FoxP3 and Helios. Transformed ex vivo Tregs have increased demethylation of FoxP3 promoter and activated genes of proliferation markers Cycline B1, Ki67 and LGALS 1. Transformed ex vivo Tregs have increased suppressive activity and up to 80-90% these cells secrete cytokines TNFα и IFNγ. Our data suggest transformed ex vivo autologous Tregs have genetic, immunophenotypic and functional characteristics for regulatory T-cells and further can be used for adoptive immunotherapy autoimmune diseases and inhibition of transplantation immunity.