Химическая модификация слитого белка на основе шаперона GroEL из Thermus thermophilus ингибитором протеаз AEBSF

Получение функциональных полноразмерных белков чаще всего подразумевает использование ингибиторов протеаз. Зарегистрированы и описаны модификации химерного белка на основе шаперона GroEL Thermus thermophilus, вызванные взаимодействием с необратимым ингибитором сериновых протеаз класса сульфонилфторидов – 4-(2-Аминоэтил)-бензолсульфонилфторид-гидрохлорида (AEBSF) в ходе пробоподготовки. Полученные формы белка после предварительной очистки были изучены методом MALDI-TOF-TOF с трипсинолизом из геля для идентификации. Показано наличие модификаций аминокислотных остатков тирозина и лизина, а также зависимость модификации от степени доступности аминокислотного остатка тирозина.

Chemical Modification of Chaperone GroEL T. thermophilus Based Fused Proteinby AEBSF Protease Inhybitor

Production of functional full-size proteins is often involving the use of protease inhibitors. Modifications due to the interaction of the protein with the common, irreversible inhibitor of the sulfonyl fluoride class of 4-(2-amino-ethyl)-benzenesulfonyl fluoride hydrochloride (AEBSF) were registered and described during the sample preparation. The obtained forms of the protein after preliminary purification were studied by the MALDI-TOF-TOF method with trypsinolysis from a gel. The dependence of the presence of a modification of the amino acid residue of tyrosine on the degree of its availability for the reaction mixture is shown.