Исследование метода ПЦР в режиме «реального времени» для обнаружения и идентификации возбудителей фитоплазмозов винограда

Для выявления и идентификации Candidatus Phytoplasma vitis Flavescence doree - возбудителя золотистого пожелтения винограда, карантинного вредного организма для территории России, и Candidatus Phytoplasma solani Bois noir - возбудителя почернения коры винограда был применен один из существующих методов диагностики ПЦР в режиме «реального времени» (ПЦР-РВ). Подобранные на участок 16SrRNA гена видоспецифичные праймерные системы исследовали на наличие ложноположительных и ложноотрицательных результатов для обнаружения в растительном материале двух вышеуказанных возбудителей фитоплазмозов. По результатам ПЦР в режиме «реального времени» было определено, что изучаемые пары праймеров позволяют выявлять целевые виды фитоплазм. Перекрестные реакции с другими видами фитоплазм не были зафиксированы. Пары праймеров не дают ложноположительных реакций с грамположительными бактериями и некоторыми видами бактерий микрофлоры винограда. Пары праймеров и соответствующие зонды FDrtF/R/FAM и BNrtF/R/FAM возможно использовать для обнаружения и идентификации фитоплазм - возбудителей болезней FD и BN в подкарантинном материале, а также при проведении мониторингов. Метод ПЦР-РВ считается достаточно простым в исполнении и не требует больших затрат времени для детекции результатов.

Research of the Real Time PCR method for detection and identification phytoplasmas on grapevine

For the detection and identification of Candidatus Phytoplasma vitis Flavescence doree — the yel-lowing grape quarantine pest for the territory of Russia and Candidatus Phytoplasma solani Bois noir — pa-thogen of blackening crust grape was used one of the existing methods of diagnosis PCR in “real time” (RT-PCR). Matched to the fragment 16SrRNA gene species-specific primer systems were tested for false positive and false negative results for the detection of plant material in the above two phytoplasmas. Accord-ing to the results of PCR in “real time”, it was determined that the studied pairs of primers allow the identifi-cation of target species phytoplasmas. Cross-reactions with other species phytoplasmas were not detected. Primers pairs do not give false positive reactions with gram-positive bacteria and some types of bacterial microflora grapes. The primer pairs and probes FDrt and BNrt can be used to detect and identify phytoplas-mas — pathogens FD and BN in the regulated articles, as well as monitoring. RT-PCR method is consi-dered to be relatively simple to implement and does not require time-consuming for the detection results.