ЭКСПРЕССИЯ ПРОТЕАЗЫ ВИЧ-1 ВЫЗЫВАЕТ ВОСПАЛИТЕЛЬНУЮ РЕАКЦИЮ И ПОВЫШАЕТ МИГРАЦИОННУЮ И МЕТАСТАТИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТИ КЛЕТОК АДЕНОКАРЦИНОМЫ НА МОДЕЛИ СИНГЕННЫХ МЫШЕЙ

Для белков gp120, tat, rev, nef и обратной транскриптазы ВИЧ-1 был показан онкогенный потенциал, связанный с индукцией окислительного стресса. Онкогенный потенциал других белков ВИЧ-1 изучен мало. Цель данной работы - оценить влияние экспрессии протеазы (PR) ВИЧ-1 на клетки in vitro и in vivo. Ген, кодирующий консенсусную последовательность PR ВИЧ-1 FSU_A (PR_A), и варианты с инактивирующей мутацией PR_Ai (D25N) и мутациями устойчивости к ингибиторам протеазы PR_Ai2mut (D25N, M46I, I54V) и PR_Ai3mut (D25N, M46I, I54V, V82A) были клонированы в pVAX1 и pRRLSIN.PGK. Иммунотоксичность pVAX_PR_Ai, pVAX_PR_Ai2mut и pVAX_PR_Ai3mut в мышах была оценена как описано [10.3390/microorganisms9061219]. Лентивирусной трансдукцией клеток 4T1luc2 были получены субклоны PR20.1 и PR20.2, экспрессирующие PR_Ai3mut. Уровень АФК в клетках был оценен окрашиванием DCFH2-DA, окисление липидов - по уровню накопления малондиальдегида (MDA). Экспрессия факторов ЕМТ (ПЦР-РВ) и миграционная активность (анализ заживления раны) были оценены в присутствии/отсутствии N-ацетил цистеина (NAC, 5µM). Мышам BALB/с подкожно имплантировали 104 клеток PR20.1/PR20.2. Рост опухолей оценивали морфометрически и по in vivo биолюминесценции с дня 1 по 18 (BLI; Spectrum CT). Метастазирование оценивали по BLI внутренних органов ex vivo. Субклон PR20.1, но не PR20.2, характеризовался повышенным уровнем АФК, MDA, миграционной активностью в сравнении с 4T1luc2. Добавление NAC не влияло на скорость миграции PR20.1, но увеличивало скорость миграции PR20.2. Уровень экспрессии факторов ЕМТ в PR20.1/PR20.2 не отличался от 4Т1luc2. В мышах PR20.2 формировали опухоли большего размера, чем 4T1luc2 и давали больше метастазов. Введение мышам плазмид, экспрессирующих варианты протеазы, приводило к спленомегалии, повышению числа WBC и доли гранулоцитов и снижению доли лимфоцитов относительно контролей. PR ВИЧ-1 усиливает миграцию клеток in vitro. In vivo экспрессия PR вызывает воспалительную реакцию и увеличивает туморигенную и метастатическую активности клеток. Эффект не связан с окислительным стрессом, но зависит от уровня экспрессии и ферментативной активности протеазы