Изомерспецифический анализ метаболитов арахидоновой кислоты при неалкогольном стеатогепатите и алкогольном поражении печени у больных ожирением

Цель исследования - определить изомерный состав метаболитов арахидоновой кислоты в крови пациентов с ожирением с алкогольным поражением печени и с неалкогольным стеатогепатитом (НАСГ). В исследование были включены 69 пациентов с ожирением и стеатогепатитом, установленным по данным ультразвукового исследования печени, а также стойкого увеличения (более 6 мес) активности АЛТв крови. Из них у 39 употребление алкоголя было исключено на основании вопросников CAGE и AUDIT, и они составили группу больных с НАСГ, у оставшихся 30 пациентов отмечалось употребление алкоголя, в связи с чем они были включены в группу пациентов со стеатогепатитом алкогольного генеза (метаболического и алкогольного) (АСГ). Идентификацию и количественное определение 5)-гидроксиэйкозатетраеновой кислоты (5-HETE), 15-НЕТЕ, а также продукта неэнзиматического окисления 11-НЕТЕ в плазме крови проводили с помощью ВЭЖХ-времяпролетной масс-спектрометрии (MS-TOF) с использованием 2-гидроксиоктано-вой кислоты в качестве внутреннего стандарта. Положение гидрок-сильной группы в HETE было установлено с помощью ВЭЖХ-тандем-ной масс-спектрометрии (ВЭЖХ-МС/МС). Переходы МС/МС были для 15-НЕТЕ m/z 319 - m/z 219; для 11-НЕТЕ m/z 319 - m/z 167; для 5-НЕТЕ m/z 319 -> m/z 115. Для оценки пищевого статуса изучали состав тела с помощью биоимпедансометрии, уровень энерготрат покоя методом непрямой калориметрии и фактического питания с использованием программы «Анализ состояния питания человека» (версия 1.2 ГУ «НИИ питания» РАМН, 2003-2005 гг.), которая позволяет автоматически рассчитать среднесуточную калорийность и химический состав рациона питания больного. Содержание в крови 15-НЕТЕ (21,6+20,2 против 11,9+13,7 мкг/мл, р=0,02) и 11-НЕТЕ (20,8+21,3 против 11,2 + 12,9 мкг/мл, р = 0,03) оказалось достоверно выше у пациентов с НАСГ по сравнению с пациентами, страдающими АСГ. При этом содержание 8+12-НЕТЕ достоверно не различалось. По данным изучения состава тела пациенты исследованных групп не различались по значению индекса массы тела (ИМТ) и массы жировой ткани, однако у пациентов с АСГ отмечались достоверно большие значения тощей (68,1+10,6 против 57,9+9,8 кг, p<0,001) и мышечной массы (39,3+6,1 против 33,2+6,8 кг, p<0,04). Исследуемые группы не различались по показателю энерготрат покоя, однако в группе пациентов с АСГ отмечалась более высокая скорость окисления белка (98,5+31 против 76,2+21,1 г/сут, р = 0,02). Не найдено различий в потреблении пациентами обеих групп общего жира, равно как насыщенных и ненасыщенных жиров, однако имелась тенденция к различиям в соотношении их потребления между группами (2,3+0,2 при НАСГ против 1,4+0,3 при АСГ). Не было также найдено достоверных различий в содержании в крови холестерина и липопротеидов высокой и низкой плотности между группами. Метаболизм арахидоновой кислоты различается у больных ожирением, страдающих НАСГ и АСГ, с преобладанием у первых более токсичных метаболитов (15-HETE и 11-HETE). Найденные отличия в метаболизме арахидоновой кислоты могут быть обусловлены как разным патогенезом заболеваний, так и различиями в нутритивном статусе пациентов, которые требуют дальнейшего изучения.

Isomeric specific analysis of hydroxyeicosatetraenoic acid in blood samples from obese patients with non-alcoholic and alcoholic steatohepatitis

The aim of the study was to perform isomeric analysis of hydroxyeicosatetraenoic acid (HETE) in blood samples from obese patients with non-alcoholic (NASH) and alcoholic (ASH) steatohepatitis. Sixty nine obese patients with liver steatosis according to abdominal US data and chronic ALT elevation were assign into two groups according to the evaluation of alcohol consumption by GAGE and AUDIT questionnaires: NASH - 39 patients and ASH - 30 patients. The identification and quantification of 5(S)-hydroxyeicosatetraenoic acid (5-HETE), 15-HETE and also non-enzymatic oxidation product 11-HETE in blood plasma were carried out by HPLC-MS-TOF with using 2-hydroxyoctanoic acid as internal standard. The position of hydroxyl group in HETE was elucidated by HPLC-MS/MS. The MS/MS transitions were for 15-HETE m/z 319 → m/z 219; for 11-HETE m/z 319 →m/z 167; for 5-HETE m/z 319→m/z 115. Patients ' body composition was evaluated by bioelectrical impedance, resting energy expenditures (REE) were assessed by indirect calorimetry and nutrition pattern was examined by food frequency questionnaire. Mean age, BMI and ALT serum level were similar in patients from ASH and NASH groups. Blood plasma 8+12-HETE concentration was also similar in both groups of patients, but concentration of 15-HETE (21,6±20,2 vs 11,9±13,7 μg/ml,p=0,02) and 11-HETE (20,8±21,3 vs 11,2±12,9 μg/ml,p=0,03) was significantly higher in NASH patients. ASH patients demonstrated higher lean body mass (68,1±10,6 vs 57,9±9,8 kg, p<0,001) and muscle mass (39,3±6,1 vs 33,2±6,8 kg, p<0,04) and higher rate of protein oxidation (98,5±31 vs 76,2±21,1 g/day,p=0,02) recalculated from REE. There were no differences found in blood lipids content as well as in consumption of total dietary fat, however, there was a trend to difference in saturated/unsaturated fatty acids ratio between groups (2,3±0,2 in NASH and 1,4±0,3 in ASH patients). In conclusion, the rate of production of eicosatetraenoic acid metabolites by lipoxygenase pathway is different in NASH and ASH overweight patients. It means that possibly different mechanisms are responsible for formation of potentially toxic fatty acids metabolites in these two types of patients. It seems likely that differences in fatty acids consumption pattern are related to this metabolic pathway.