Направления дифференцировки аллогенных мультипотентных стромальных клеток в регенерирующей печени

Цель работы - изучить заместительный механизм терапевтической активности мультипотентных стромальных клеток пупочного канатика на модели регенерации печени крыс после субтотальной резекции органа. Материал и методы. Работа выполнена на крысах аутбредного стока Спрейг-Доули, у которых воспроизведена модель регенерации печени после субтотальной резекции - удаление 80% паренхимы. Мультипотентные стромальные клетки выделяли из стромы пупочного канатика крысы методом эксплантов, подтверждали их принадлежность к указанному типу, метили витальным красителем РКН26 и трансплантировали в печень непосредственно после резекции. Далее животных выводили из эксперимента на 1-, 7- и 10-е сутки после субтотальной резекции. Печень удаляли, замораживали при -80°С и готовили криосрезы. Полученные срезы окрашивали первыми антителами к соответствующему белку-маркеру и вторыми антителами, несущими флуоресцентную метку, ядра докрашивали DAPI. Результаты. На всех сроках исследования в регенерирующей печени обнаруживались клетки, несущие мембранную метку РКН26. При изучении направления дифференцировки было обнаружено, что введенные клетки не встраивались в балки гепатоцитов или стенку желчных протоков, а также не экспрессировали маркер гепатоцитов - цитокератин 18, холангиоцитов - цитокератин 19. Трансплантированные клетки располагались в соединительной ткани вокруг сосудов, при этом введенные клетки не экспрессировали маркер гладких миоцитов - альфа гладкомышечный актин, однако в единичных клетках визуализировался маркер эндотелиоцитов CD31. Выводы. Дифференцировка мультипотентных стромальных клеток не является ведущим механизмом активности клеток в условиях регенерации печени после субтотальной резекции.

Directions of allogeneic multipotent stromal cells differentiation in the regenerating liver

The aim of the study was to study the replacement mechanism of the therapeutic activity of umbilical multipotent stromal cells in a model of liver regeneration after subtotal resection in rats. Material and methods. The work was performed on rats of outbred Sprayg-Dowley rats, which reproduced the model of liver regeneration after subtotal resection - removal of 80% of the liver mass. Cell cultures were obtained from rat umbilical cord intervascular tissue by explant culture. Their identity as multipotent stromal cells was confirmed by observations of characteristic morphology, adhesive properties, robust clonogenic growth on untreated plastic, specific surface antigen expression profile, and differentiation capacities to the osteogenic, chondrogenic and adipogenic phenotype. The multipotent stromal cells of the third passage were labeled with PKH26 transplanted into the regenerating liver during liver subtotal resection. Differentiation of the transplanted cells was subsequently evaluated with fluorescence. Results. Multipotent stromal cells differentiation was assessed with antibodies to hepatocyte-specific marker cytokeratin 18 (CK18), cholangiocyte-specific protein CK19, smooth muscle cell-specific protein α-SMA, the endothelial cell marker CD31, or the active fibroblast marker FAPα. It was shown that the injected cells did not express the hepatocyte marker - cytokeratin 18, cholangiocyte marker - cytokeratin 19, as well as smooth muscle cells - alpha smooth muscle actin, single cells expressed endothelial cells marker - CD31. Conclusions. Thus, the differentiation of multipotent stromal cells is not the leading mechanism of cell activity in conditions of liver regeneration after subtotal resection.