Роль микроРНК в патогенезе рецидивирующих лейомиом матки

Цель исследования - определить эпигенетические детерминанты рецидивирующей лейомиомы матки (ЛМ) в репродуктивном возрасте. Материал и методы. В исследовании приняли участие 66 пациенток, которые были разделены на 2 группы: в I вошли 42 пациентки, перенесшие миомэктомию, из них 18 (42,9%) с рецидивом в анамнезе, во II - 24 после экстирпации матки, из них 4 (16,7%) с рецидивом в анамнезе. Пациентки проходили лечение и наблюдение в гинекологическом отделении ГБУЗ ГКБ № 29 им. Н.Э. Баумана ДЗМ. Из операционного материала вырезали участок ткани размерами 5x5 см (из миоматозных узлов и миометрия в случае экстирпации матки). Вырезанная ткань была заморожена при температуре -25 °С. Исследовалась экспрессия 21 микроРНК: Let7, 20a, 23b, 29b, 146b, 92a-1-5, 93, 100-3p, 10b, 223, 182, 146b, 21, 200a, 30a, 156a, 122, 10a, 15a, 16, 26a. Измерение уровней экспрессии микроРНК методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени проводили на амплификаторе CFX96 (Bio-Rad Laboratories, США). Для анализа полученных данных пороговых циклов ПЦР в реальном времени использовали метод 2(-ACt) (Livak, Schmittgen, 2001). Статистическую обработку полученных данных проводили на основе непараметрического коэффициента Манна-Уитни с использованием программного обеспечения STATISTICA 12.0 (StatSoft Inc., США). При значении p<0,05 разницу считали статистически достоверной. Дизайн. Проведено проспективное нерандомизированное продольное исследование. Результаты. Группы были сопоставимы по возрасту менархе и начала половой жизни, частоте перенесенных и сопутствующих экстрагенитальных и гинекологических заболеваний. Миомэктомия проводилась пациенткам более молодого возраста [39,6 (37,9-41,2) года] в сравнении с группой с экстирпацией матки [46,8 (46,0-47,5) года] со статистически значимой разницей p=0,001. При изучении паритета пациенток в I и II группах также были выявлены статистически значимые различия (p=0,021). В репродуктивном возрасте пациенткам с бесплодием достоверно чаще выполнялась миомэктомия в сравнении с пациентками, у которых в анамнезе были самопроизвольные роды (p=0,032). При сравнении длительности заболевания в зависимости от объема оперативного лечения статистически значимых различий выявлено не было. Вместе с тем миомэктомия была выполнена каждой 4-й пациентке с размером матки до 10 нед (38,1%), каждой 2-й с размером матки от 11 до 15 нед (50,0%) и 11,9% - более 15 нед, а в группе пациенток, прооперированных в объеме экстирпации матки, - 4,2; 66,7 и 29,2% соответственно, p=0,006. При сравнении размеров матки в зависимости от объема оперативного лечения были получены статистически значимые различия (p=0,005). Рецидив заболевания в течение 1-3 лет был зарегистрирован у каждой 2-й пациентки, перенесшей миомэктомию [n=18 (42,9%)], и у каждой 6-й, перенесшей экстирпацию матки [n=4 (16,7%)]. При анализе паритета пациенток с рецидивирующей ЛМ и без рецидива были получены статистически значимые различия (p=0,012). Установлено, что у пациенток без родов в анамнезе выше вероятность выявления рецидивирущей ЛМ в сравнении с пациентками с самопроизвольными родами в анамнезе (p=0,023). Между / ' сопоставляемыми признаками отмечалась относительно сильная связь (V Крамера = 0,360). Установлены статистически значимые различия и в длительности заболевания у сравниваемых групп (с рецидивом и без рецидива, p=0,023). При сравнении уровня экспрессии микроРНК в миоматозных узлах в зависимости от объема оперативного лечения (миомэктомия или экстирпация матки) не выявлено статистически значимых различий. Вместе с тем при сравнении экспрессии микроРНК в миоматозных узлах и миометрии в материале после экстирпации матки получены статистически значимые различия для следующих 8 микроРНК из 20: let7, 20a, 26a, 29b, 100, 10b, 21, 10a. Экспрессия микроРНК: Let7, 20a, 100, 10a была в 1,5 раза ниже в миоматозном узле по сравнению с аналогичными показателями в миометрии, а микроРНК-26а, микроРНК-29Ь, микроРНК-10Ь - в 2 раза. Что касается микроРНК-21, то экспрессия данной микроРНК была в 1,6 раза выше в миоматозном узле по сравнению с аналогичным показателем в миометрии. Заключение. Выявленные различия в экспрессии 8 микроРНК из 20 изученных (let7, 20a, 26a, 29b, 100, 10b, 21, 10a-5) доказывают, что эти нуклеотидные последовательности играют ключевую роль в формировании ЛМ. Это дает стимул для дальнейшего углубленного исследования в данной области. Авторы не выявили связь между уровнем экспрессией микроРНК в миоматозных узлах в зависимости от объема оперативного лечения (миомэктомия или экстирпация матки) и в группах сравнения в зависимости от рецидива в анамнезе. Напротив, выявлено снижение уровня экспрессии Mir Let7, Mir 20a, Mir 100, Mir 10a-5p в 1,5 раза в миоматозном узле по сравнению с аналогичными показателями в миометрии, а микроРНК-26а, микроРНК-29Ь, микроРНК-Mb - в 2 раза. Что касается микроРНК-21, экспрессия данной микроРНК была в 1,6 раза выше в миоматозном узле по сравнению с показателем в миометрии.

The aim of the study was to determine the epigenetic determinants of recurrent uterine leiomyoma at reproductive age patients. Material and methods. The study included 66 patients who were divided into two groups: I - 42 patients who underwent myomectomy, of which 18 (42.9%) had a history of relapse; II - 24 who underwent hysterectomy, of which 4 (16, 7%) with a history of relapse. The patients underwent treatment and observation in the gynecology department at City Clinical Hospital # 29 named after N.E. Bauman. A section of tissue measuring 5x5 cm from leiomyoma nodes and myometrium was cut out from the surgical material in case of hysterectomy. The cut tissue was frozen at -25 °C. The expression of 21 microRNAs was studied: let7, 20a-3p, 23b, 29b, 146b-5p, 92a-1-5, 93-3p, 100-3p, 10b, 223-3p, 182-5p, 146b-5p, 21-5p, 200a-3p, 30a-3p, 156a-5p, 122-5p, 10a-5p, 15a, 16, 26a. MicroRNA expression levels were measured by real-time PCR using a CFX96 amplifier (Bio-Rad Laboratories, USA). Analysis of the obtained real-time PCR threshold cycle data was carried out using the 2(-ACt) method (Livak and Schmittgen, 2001). Statistical processing of the obtained data was carried out on the basis of the nonparametric Mann-Whitney coefficient using STATISTICA 12.0 software (StatSoft Inc., USA). If p<0.05, the difference was considered statistically significant Design. The prospective non-randomized Longitudinal study was performed. Results. The groups were comparable in age at menarche and onset of sexual activity, frequency of previous and concomitant extragenital and gynecological diseases. Myomectomy was performed in younger patients 39.6 years old (37.9-41.2) compared to the group of patients with hysterectomy - 46.8 years old (46.0-47.5) with a statistically significant difference p=0.001. When studying the parity of patients in groups I and II, statistically significant differences were also revealed (p=0.021). In reproductive age, patients with infertility underwent myomectomy significantly more often compared to patients with a history of spontaneous childbirth (p=0.032). When comparing the duration of the disease depending on the volume of surgical treatment, no statistically significant differences were found. At the same time, myomectomy was performed on every fourth patient with a uterine size up to 10 weeks of pregnancy (38.1%), every second from 11 to 15 weeks of pregnancy (50.0%) and 11.9% - more than 15 weeks of pregnancy, and in the group of patients operated on in the scope of hysterectomy in 4.2%; 66.7% and 29.2% respectively, p=0,006. When comparing the size of the uterus depending on the volume of surgical treatment, statistically significant differences were obtained (p=0.005). Every second patient who underwent myomectomy [n=18 (42.9%)] has a history of reccurence of the disease occurred within 1-3 years, and every sixth person who underwent hysterectomy had a history of relapse of the disease [n=4 (16.7%)]. When analyzing the parity of patients with recurrent UL and without relapse, statistically significant differences were obtained (p=0.012). It was found that patients without a history of childbirth have a higher probability of recurrent UL compared to patients with a history of spontaneous childbirth (p=0.023). There was a relatively strong connection between the compared characteristics (Cramer's V = 0.360). Statistically significant differences were also established in the duration of the disease in the compared groups (with and without relapse, p=0.023). When comparing the level of microRNA expression in myomatous nodes depending on the volume of surgical treatment (myomectomy or hysterectomy), no statistically significant differences were revealed. However, when comparing the expression of microRNAs in myomatous nodes and myometrium in the material after hysterectomy, statistically significant differences were obtained for the following 8 microRNAs out of 20: let7, 20a, 26a, 29b, 100, 10b, 21-5p, 10a-5p. The expression of Mir Let7, Mir 20a, Mir 100, Mir 10a-5p was one and a half times lower in the myomatous node compared with similar indicators in the myometrium, and Mir 26a, Mir 29b, Mir 10b - two times lower. As for Mir 21-5p, the expression of this microRNA was 1.6 times higher in the myomatous node compared to that in the myometrium. Conclusion. The identified differences in the expression of 8 microRNAs out of 20 studied: let7, 20a, 26a, 29b, 100, 10b, 21-5p, 10a-5p prove that these nucleotide sequences play a key role in the formation of UL. This provides incentive for further in-depth research in this area. We have not identified a relationship between the level of microRNA expression in myomatous nodes depending on the volume of surgical treatment (myomectomy or hysterectomy) and in the comparison groups depending on the history of relapse. On the contrary, a decrease in the expression levels of Mir Let7, Mir 20a, Mir 100, Mir 10a-5p was detected by one and a half times in the myomatous node, compared with similar indicators in the myometrium, and Mir 26a, Mir 29b, Mir 10b - by a factor of two. As for Mir 21-5p, the expression of this microRNA was 1.6 times higher in the myomatous node compared to that in the myometrium.